支鏈/直鏈/總淀粉含量檢測試劑盒（分光光度法50T/48S）
| 貨號 | SH0294 | 售價（元） | 1920 |
| 規(guī)格 | 50T/48S | CAS號 |
- 產品簡介
- 相關產品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0294 |
支鏈/直鏈/總淀粉含量檢測試劑盒（分光光度法50T/48S） |
50T/48S |
谷物淀粉中的直鏈淀粉最常見的測定方法是對直鏈淀粉的碘結合能力進行電位法、電流法或比色法測量，從而形成直鏈淀粉-碘包合復合物。然而，這些方法存在不確定性。支鏈淀粉-碘復合物也會形成，它們會降低通過非比色法測量的游離碘的濃度，并且可能會在與比色法中的直鏈淀粉-碘復合物相似的波長處吸收。
本試劑盒利用伴刀豆球蛋白A只與支鏈淀粉結合而不與直鏈淀粉結合的特性，使其分離，再用僅水解淀粉的酶復合物使淀粉水解為葡萄糖，通過檢測葡萄糖含量得到直鏈、支鏈和總淀粉的含量。
保存條件：
未配制前在規(guī)定存儲條件下6個月內有效，配制使用后在規(guī)定存儲條件下3個月內有效。（各組分詳細儲存條件見瓶身）
試劑盒組成與配制：
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試劑名稱 |
儲存條件 |
SH0294-50T |
配制過程 |
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試劑一 |
-20℃ |
粉劑 mg×1瓶 |
用前甩幾下試劑落入底部，再加25ml的ConA溶劑將其溶解備用，用前可分為適當大小的小份，并在使用之間儲存在-10℃以下的聚丙烯管中，如有可能，在使用過程中保持冷卻。（未配制時在-20℃穩(wěn)定2年以上，配制使用后在-20℃穩(wěn)定1~3個月） |
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試劑二 |
-20℃ |
粉劑 mg×1瓶 |
用前甩幾下試劑落入底部，再將瓶中內容物溶解在10 ml乙酸鈉緩沖液（100 mM，pH 4.5）中。分為適當大小的等分試樣，并在使用期間儲存在-10℃以下的聚丙烯管中，如有可能，在使用過程中保持冷卻，（未配制時在-20℃穩(wěn)定2年以上，配制使用后在-20℃穩(wěn)定1~3個月） |
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試劑三 |
4℃ |
粉劑g×1瓶 |
用之前加450ml蒸餾水溶解混勻，后用2M氫氧化鉀調節(jié)至pH7.4，最后用蒸餾水定容至500ml，即為試劑三。 |
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試劑四 |
-20℃ |
粉劑 mg×1瓶 |
用60ml試劑三緩沖液溶解試劑四中的內容物，并將其定量轉移到含有剩余試劑三緩沖液的瓶子中。用鋁箔蓋住這個瓶子，以保護密封的試劑不受光照。（未配制時在2-5℃或＜-10℃下存放超過12個月，配制使用后在2-5℃或＜-20℃可穩(wěn)定1~3個月） 備注：如果該試劑要以冷凍狀態(tài)儲存，則最好將其分裝為小份，在使用過程中僅冷凍/解凍一次。 新制備試劑，其顏色為淺黃色或淺粉色。在2-3個月后，若該溶液將呈現(xiàn)出更強烈的粉紅色應立即對照蒸餾水讀數(shù)，吸光度應小于0.05，若大于此數(shù)值，則表示該溶液不可再使用。 |
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標準品 |
4℃ |
液體5ml×1瓶 |
D-葡萄糖標準溶液（5 ml，1.0 mg/ml） |
1. 所需的儀器和用品：可見分光光度計、10mm玻璃比色皿、水浴鍋、可調式移液器、冰、 二甲基亞砜（DMSO,分析級）、乙醇、乙酸和蒸餾水
2. 需配試劑：
乙酸鈉緩沖液（100 mM，pH 4.5）：
向900 ml蒸餾水中添加5.9 ml冰醋酸，通過添加NaOH溶液將pH值調節(jié)至pH 4.5，加入0.2g疊氮化鈉（防腐劑，若沒有該試劑可不添加），調節(jié)體積至1L。
濃縮ConA溶劑（600 mM，pH 6.4醋酸鈉緩沖液）：
稱取49.2 g無水乙酸鈉，175.5 g NaCl，0.5g二水合CaCl2，0.7g 六水合MgCl2和0.7 g 四水合MnCl2，后加入900ml蒸餾水。逐滴加入冰醋酸，調節(jié)pH至6.4（不能低于 6.4，否則重新配置），然后用蒸餾水將其定容至1L。
ConA溶劑（工作濃度）：取30ml濃縮ConA溶劑用蒸餾水將其定容（比例為3 ：7）至100ml，現(xiàn)用現(xiàn)配。
淀粉含量測定：
1. 準確稱量淀粉或面粉樣品20±0.2mg，放入 10 ml離心管中；
2. 向離心管中加入1ml DMSO，同時在渦旋儀上低速輕輕攪拌；之后蓋上管子，在100℃沸水浴中加熱，直到樣品完全分散（約1min）；
注意：需確保沒有凝膠狀的淀粉塊存在
3. 在渦旋儀上高速攪拌離心管中的內容物，并將離心管放入水浴鍋中100℃水浴15min，期間使用渦旋儀混勻3~5次。
4. 加熱結束后立即對樣品進行渦旋并加入 2 ml 乙醇（95%(v/v)），繼續(xù)在渦旋儀上持續(xù)攪拌，混合均勻后再加入 4 ml 乙醇（95%(v/v)），蓋上管子并倒置使樣品于液體充分混合15min；
注意：倒置靜置時管中會形成淀粉沉淀，為正?，F(xiàn)象
5. 將離心管以2,000xg離心5min，棄去上清液，倒置在紙巾上瀝干10min，確保所有的乙醇都已排空，將沉淀用于在隨后的直鏈淀粉和總淀粉測定中。
6. 將含有淀粉樣品沉淀的離心管放置在渦旋儀上輕輕渦旋同時加入2ml DMSO并立即渦旋混合，之后將離心管放入水浴鍋中100℃沸水浴15min，并不時攪拌，防止出現(xiàn)凝膠狀的塊狀物；
7. 將試管從沸水浴中取出后冷卻至室溫，加入4ml ConA溶劑，充分混合，然后將試管內容物定量轉移（用ConA溶劑反復洗滌）到25 ml容量瓶中，并定容至25ml，即為待測液。注：若是谷物樣本，第6步得到的溶液中有雜質，需待自然冷卻 5min 后于3000rpm 室溫（低于10℃會凍結）離心 5min，上清液備用；若是純淀粉樣本，第6步得到的溶液呈澄清狀，不需離心自然冷卻即可。 注意：樣品應在2小時內進行檢測。
上機檢測：
（1）.可見分光光度計預熱 30min 以上，調節(jié)波長至 510nm，空白檢測管調零。
（2）.直鏈淀粉上清液制備，在 EP 管中依次加入：
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試劑名稱 |
直鏈淀粉測定管（ml） |
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待測液 |
1ml |
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試劑一 |
0.5ml |
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反復顛倒混勻（不能渦旋）幾下，靜置 1 h， 14000rpm 室溫離心 10min，上清液待測 |
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上清液 |
1 ml |
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乙酸鈉緩沖液 （100 mM，pH 4.5） |
3 ml |
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95-100℃煮沸 5min 后，40℃溫育 5min， 觀察：有沉淀產生 |
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試劑二 |
0.1 ml |
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混勻，40℃ 水浴 30min后，2000g室溫離心5min，取上清液待測 |
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（3）.總淀粉上清液制備，在 EP 管中依次加入：
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試劑名稱 |
總淀粉測定管（ml） |
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待測液 |
0.5 ml |
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乙酸鈉緩沖液 （100 mM，pH 4.5） |
4 ml |
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試劑二 |
0.1 ml |
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40℃ 水浴 30min 后待測 |
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（4）.顯色反應：
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試劑名稱 |
直鏈淀粉測定管（ml） |
總淀粉測定管（ml） |
空白管（僅做一次） |
標準管（僅做一次） |
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樣品 |
1 ml（直鏈淀粉上清液） |
1 ml（總淀粉上清液） |
1 ml（乙酸鈉緩沖液（100 mM，pH 4.5）） |
0.1 ml（標準品）+0.9 ml（乙酸鈉緩沖液（100 mM，pH 4.5）） |
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顯色 （三和四混合液） |
4 ml |
4 ml |
4 ml |
4 ml |
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混勻，40℃水浴避光20min，于 510nm 處讀取吸光值 A |
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反應結束后將3ml液體轉移至玻璃比色皿中，于510nm處讀數(shù)；
注意事項：
1、二甲亞砜作為皮膚刺激物，因此應謹慎使用。它通過皮膚吸收，會對皮膚和眼睛造成刺激。使用時穿戴防護品并避免濺出溶劑，盡可能在通風柜中使用。
2. 刀豆球蛋白 A 通過吸入、皮膚接觸和攝入有害。影響可能是不可逆的并且可能涉及致畸作用。處理結晶 Con A 時穿戴適當?shù)姆雷o用品及佩戴手套。